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C57BL/6JCya-Rpa2em1flox/Cya 条件性基因敲除小鼠
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产品名称:
Rpa2-flox
产品编号:
S-CKO-04829
品系背景:
C57BL/6JCya
小鼠资源库
* 使用本品系发表的文献需注明:Rpa2-flox mice (Strain S-CKO-04829) were purchased from Cyagen.
交付类型
周龄
性别
基因型
数量
基本信息
品系名称
C57BL/6JCya-Rpa2em1flox/Cya
品系编号
CKOCMP-19891-Rpa2-B6J-VA
产品编号
S-CKO-04829
基因名
Rpa2
品系背景
C57BL/6JCya
基因别称
RPA34;Rf-A2
NCBI号
修饰方式
条件性基因敲除
品系说明
该品系是基于策略设计时的数据库信息制作而成,建议您在购买前查询最新的数据库和相关文献,以获取最准确的表型信息。
小鼠表型
质控标准
精子检测
① 冷冻前验证精子活力观察
② 冷冻验证每批次进行复苏验证
品系状态
在研小鼠
环境标准
SPF
供应地区
中国
品系详情
Rpa2位于小鼠的4号染色体,采用基因编辑技术,通过高通量电转受精卵方式,获得Rpa2基因条件性敲除小鼠,性成熟后取精子冻存。
Rpa2-flox小鼠是由赛业生物(Cyagen)采用基因编辑技术构建的条件性敲除小鼠。Rpa2基因位于小鼠4号染色体上,由9个外显子组成,其中ATG起始密码子在1号外显子,TGA终止密码子在9号外显子。条件性敲除区域(cKO区域)位于第6至8号外显子,包含约2231个碱基对的编码序列。删除该区域会导致小鼠Rpa2基因功能的丧失。Rpa2-flox小鼠模型的构建过程包括将基因编辑工具和靶向载体共同注入受精卵。随后,对出生的小鼠进行PCR和测序分析进行基因型鉴定。该模型可用于研究Rpa2基因在小鼠体内的功能,为相关疾病的发病机制研究提供重要工具。
基因研究概述
Rpa2,也称为复制蛋白A的32kDa亚基,是复制蛋白A(RPA)复合体中的一个重要成分。RPA是一个异源三聚体复合物,由RPA1、RPA2和RPA3三个亚基组成,主要功能是结合单链DNA,参与DNA复制和修复过程。RPA2在DNA复制叉的稳定和调控中起着关键作用,其异常表达或功能缺陷与多种疾病的发生发展密切相关。
RPA2在DNA复制叉的调控中发挥着重要作用。研究发现,染色盒蛋白同源物3(CBX3)与RPA2结合,并调节RPA2在停滞的复制叉上的保留。CBX3被RPA2招募到停滞的复制叉上,并抑制环指和WD重复结构域3(RFWD3)介导的复制重启。酪蛋白激酶2(CK2)激酶在丝氨酸-95位点上对CBX3进行磷酸化,增强了钙粘蛋白1(CDH1)介导的CBX3降解和RPA2在停滞复制叉上的动态变化,从而允许复制叉的重启。由于基因扩增或CK2抑制剂治疗导致的CBX3表达增加,使前列腺癌细胞对多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂敏感,并诱导复制应激和DNA损伤[1]。此外,RPA2在子宫内膜组织中的异常上调也与反复种植失败(RIF)患者的子宫内膜分化受损有关。RPA2在子宫内膜组织中显著上调,特别是在正常月经周期的增殖期。在子宫内膜基质细胞(HESC)的分化过程中,RPA2的表达下调。RPA2过表达通过抑制催乳素(PRL)和胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)的表达,损害了HESC的分化[2]。
RPA2的变异也被发现与端粒生物学紊乱(TBDs)的发生相关。研究发现,RPA2的单等位基因变异c.767A>G; Y256C与TBDs的临床表现和短端粒相关。虽然RPA2突变体不影响RPA的单链DNA结合和G-四链体展开特性,但突变体降低了RPA2与泛素连接酶RFWD3的结合亲和力,并降低了RPA的泛素化。使用工程敲入细胞系,发现RPA在端粒上的积累,这不会触发ATR激活,但会导致短和无功能的端粒。最终,两个患者在一部分血细胞中获得了体细胞遗传拯救事件,涉及POT1基因或TERT启动子,这些基因已知可以对抗端粒缩短的加速[3]。
RPA2在癌症的发生发展中起着重要作用。研究发现,RPA2在乳腺癌组织和细胞系中显著上调。RPA2的过表达在MCF7和MDA-MB-231细胞中促进了细胞增殖、粘附、迁移和侵袭,并诱导MCF7细胞的上皮-间质转化(EMT)。在MDA-MB-231细胞中敲除RPA2诱导细胞凋亡并抑制集落形成、EMT和侵袭。结合实验表明,多内分泌肿瘤1型(MEN1)肿瘤抑制基因产物menin与RPA2相互作用。RPA2的过表达抑制了menin-NF-κB p65复合物的形成,并抑制了menin对NF-κB调控基因表达的抑制作用,这些基因的表达有助于肿瘤进展。相反,RPA2的敲低促进了menin-p65复合物的形成,并抑制了NF-κB介导基因的表达。RPA2的表达是通过E2F1依赖性机制在MCF7和MDA-MB-231细胞中用NF-κB激活剂TNF-α或脂多糖(LPS)处理后诱导的。这些结果表明,RPA2依赖的肿瘤发生是通过缓解menin对NF-κB调控转录的抑制作用来增强NF-κB活性介导的[4]。
RPA2在植物中的功能也得到了研究。研究发现,拟南芥RPA2是一种保守的蛋白质,具有DNA复制和DNA修复结构域,是转录基因沉默(TGS)的一个新成分,对内源性小RNA的积累不是必需的。bru1、cmt3、ddm1、fas1、fas2、hda6、hog1、met1和rpa2突变体在分散的Athila/TSI转座子和转座子重复位点L5的TGS中受损,但与bru1、cmt3、ddm1、fas1、fas2、hda6、hog1和met1不同,rpa2和mom1突变体不影响5S衍生siRNA的积累。与BRU1、FAS1、FAS2和MOM1一样,RPA2对DNA甲基化不是必需的,rpa2、bru1、fas1和fas2突变体对DNA损伤剂MMS表现出超敏性,而mom1突变体则没有。这些结果表明,TGS机制在某些位点与DNA复制、修复或重组机制相协调,并强调了TGS途径的多样化[5]。
综上所述,RPA2在DNA复制、修复和转录基因沉默中发挥着重要作用。RPA2的异常表达或功能缺陷与多种疾病的发生发展密切相关,包括端粒生物学紊乱、反复种植失败、乳腺癌和植物转录基因沉默。RPA2的研究有助于深入理解DNA复制、修复和转录基因沉默的生物学功能和疾病发生机制,为疾病的治疗和预防提供新的思路和策略。
参考文献:
1. Ma, Jian, Ren, Dianyun, Wang, Zixi, Huang, Haojie, Li, Lei. 2024. CK2-dependent degradation of CBX3 dictates replication fork stalling and PARP inhibitor sensitivity. In Science advances, 10, eadk8908. doi:10.1126/sciadv.adk8908. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38781342/
2. Zhao, Huishan, Lv, Na, Cong, Jianxiang, Bao, Hongchu, Liu, Xuemei. 2023. Upregulated RPA2 in endometrial tissues of repeated implantation failure patients impairs the endometrial decidualization. In Journal of assisted reproduction and genetics, 40, 2739-2750. doi:10.1007/s10815-023-02946-1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37831348/
3. Kochman, Rima, Ba, Ibrahima, Yates, Maïlyn, Saintomé, Carole, Coulon, Stéphane. 2024. Heterozygous RPA2 variant as a novel genetic cause of telomere biology disorders. In Genes & development, 38, 755-771. doi:10.1101/gad.352032.124. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39231615/
4. Chen, Chao-Chung, Juan, Chi-Wen, Chen, Kuan-Yu, Lee, Janq-Chang, Chang, Ming-Chung. . Upregulation of RPA2 promotes NF-κB activation in breast cancer by relieving the antagonistic function of menin on NF-κB-regulated transcription. In Carcinogenesis, 38, 196-206. doi:10.1093/carcin/bgw123. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28007956/
5. Elmayan, Taline, Proux, Florence, Vaucheret, Hervé. . Arabidopsis RPA2: a genetic link among transcriptional gene silencing, DNA repair, and DNA replication. In Current biology : CB, 15, 1919-25. doi:. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16271868/