智鼠故事 
C57BL/6JCya-Rad51bem1flox/Cya 条件性基因敲除小鼠
复苏/繁育服务
产品名称：
Rad51b-flox
产品编号：
S-CKO-04678
品系背景：
C57BL/6JCya
* 使用本品系发表的文献需注明：Rad51b-flox mice (Strain S-CKO-04678) were purchased from Cyagen.
交付类型
周龄
性别
基因型
数量
只
基本信息
品系名称
C57BL/6JCya-Rad51bem1flox/Cya
品系编号
CKOCMP-19363-Rad51b-B6J-VA
产品编号
S-CKO-04678
基因名
Rad51b
品系背景
C57BL/6JCya
基因别称
R51H2；mREC2；Rad51l1
NCBI号
修饰方式
条件性基因敲除
品系说明
该品系是基于策略设计时的数据库信息制作而成，建议您在购买前查询最新的数据库和相关文献，以获取最准确的表型信息。
小鼠表型
MGI:1099436 Embryos homozygous for a knock-out allele are severely growth retarded and exhibit complete early embryonic lethality; interestingly, mutant embryos survive and develop further in a Trp53-null background.
质控标准
精子检测
① 冷冻前验证精子活力观察
② 冷冻验证每批次进行复苏验证
品系状态
在研小鼠
环境标准
SPF
供应地区
中国
品系详情
Rad51b位于小鼠的12号染色体，采用基因编辑技术，通过高通量电转受精卵方式，获得Rad51b基因条件性敲除小鼠，性成熟后取精子冻存。
Rad51b-flox小鼠模型是由赛业生物（Cyagen）采用基因编辑技术构建的条件性敲除小鼠。Rad51b基因位于小鼠12号染色体上，由11个外显子组成，其中ATG起始密码子在2号外显子，TAG终止密码子在11号外显子。条件性敲除区域（cKO区域）位于5号外显子，包含137个碱基对的编码序列。删除该区域会导致小鼠Rad51b基因功能的丧失。
Rad51b-flox小鼠模型的构建过程包括将核糖核蛋白（RNP）和靶向载体共同注入受精卵。随后，对出生的小鼠进行PCR和测序分析进行基因型鉴定。基因型鉴定结果显示，胚胎纯合敲除等位基因的小鼠出现严重生长迟缓和完全的早期胚胎致死性。有趣的是，在Trp53基因缺失的背景下，突变胚胎可以存活并进一步发育。此外，敲除5号外显子会导致基因移码，并覆盖13.05%的编码区域。第五号内含子的5'-loxP位点插入片段大小为11383 bp，第五号内含子的3'-loxP位点插入片段大小为9998 bp。有效的cKO区域大小约为0.6 kb。
Rad51b-flox小鼠模型可用于研究Rad51b基因在小鼠体内的功能。通过敲除Rad51b基因的5号外显子，研究人员可以研究该基因在DNA修复、基因稳定性等方面的作用。此外，该模型还可以用于研究Rad51b基因缺失对小鼠生长发育和胚胎发育的影响。
Rad51b-flox小鼠模型的构建是基于现有数据库中的遗传信息，但考虑到生物过程的复杂性，目前技术水平无法预测loxP插入对基因转录、RNA剪接和蛋白质翻译的影响。因此，在实验过程中可能需要根据实际情况调整目标区域。
基因研究概述
RAD51B基因编码的是一种蛋白质，这种蛋白质与RAD51C、RAD51D和XRCC2蛋白一起形成BCDX2复合体，在细胞中的同源重组（HR）过程中发挥关键作用。同源重组是细胞内DNA修复的一个重要机制，负责保护并重新启动受损的复制叉，修复染色体断裂，以及在减数分裂过程中交换遗传物质。RAD51B基因的突变与乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌等癌症的发生密切相关，也与一种遗传性易感癌症的综合征——范可尼贫血有关[1]。这些基因突变会影响HR过程的效率，使得细胞在DNA损伤时更难以修复，从而增加癌症的风险。
在BRCA2肿瘤抑制蛋白的功能被广泛研究的同时，RAD51B蛋白的细胞功能尚未完全明了。然而，研究表明，RAD51B的基因敲除会导致生长缺陷、RAD51聚焦形成减少、染色体异常自发产生、对PARP抑制剂的敏感性增加以及复制叉缺陷[1]。这些发现表明RAD51B在维持基因组的稳定性中扮演了重要的角色。通过冷冻电子显微镜、AlphaFold2建模和结构蛋白质组学技术，研究者们确定了BCDX2复合体的结构，发现RAD51C-RAD51D-XRCC2模拟了三个RAD51原体在核蛋白丝中的排列，而RAD51B则表现出高度的动态性。进一步的生化分析和单分子分析表明，BCDX2能够刺激RAD51丝状体的核化和延伸，这对于重组DNA修复至关重要，并且这个过程依赖于RAD51B和RAD51C的偶联ATP酶活性[1]。
在化疗耐药性卵巢癌的全基因组特征研究中，发现RAD51B基因的断裂通常会导致肿瘤抑制功能的失活，这可能是化疗耐药性的一个重要驱动因素[2]。此外，RAD51B基因的单核苷酸多态性（SNPs）与垂体腺瘤的发生有关，其中rs2588809 TT基因型与女性患者中垂体腺瘤的发生风险增加相关[3]。这些研究结果表明，RAD51B基因不仅与癌症的发生有关，还可能影响癌症的治疗反应。
在多种癌症类型中，同源重组相关基因突变的发生率尚未得到充分研究。一项研究通过分析52,426个肿瘤的分子谱，发现HR-DDR基因突变在所有肿瘤谱系中的发生率并不一致，其中子宫内膜癌、胆管癌、膀胱癌和卵巢癌等癌症类型的HR-DDR基因突变率较高[4]。此外，BRCA1和BRCA2基因的胚系突变与乳腺癌和卵巢癌的风险显著相关，而其他HR基因如PALB2的突变也已被重新分类为癌症易感基因[5]。这些发现为探索HRD靶向治疗，包括PARP抑制剂、DNA损伤化疗药物以及新型ATR抑制剂等提供了方向。
在卵巢癌的流行病学研究中，研究者们估计了RAD51B、RAD51C和RAD51D基因有害突变对侵袭性上皮性卵巢癌的贡献。研究发现，在这些基因中，RAD51C和RAD51D突变的发生率更高，并且与卵巢癌的风险增加相关，这表明这两个基因可能是卵巢癌的易感基因，并可能被纳入常规临床遗传测试[6]。此外，全基因组分析发现，非编码区域的突变也涉及癌症相关基因，如RAD51B，这可能反映了肿瘤细胞的起源和表观遗传调控[7]。
最后，RAD51B基因的胚系突变也与胰腺导管腺癌（PDAC）的发生相关。研究发现，在PDAC患者中，RAD51B基因的胚系突变与HRD评分相关，这表明RAD51B可能是一个重要的遗传风险因素，并建议将其纳入HR-DDR通路的胚系测试中[8]。另外，一项研究揭示了长链非编码RNA（lncRNA）RAD51B-AS1在卵巢癌中的作用。RAD51B-AS1通过上调RAD51B的表达，促进卵巢癌细胞的增殖、转移和对失巢凋亡的抵抗，并激活Akt/Bcl-2信号通路，这表明RAD51B-AS1可能是卵巢癌诊断和治疗的潜在靶点[9]。此外，RAD51B融合的肉瘤表现出异质性的表型，这表明RAD51B融合可能与不同类型的肉瘤发生相关[10]。
综上所述，RAD51B基因在维持基因组稳定性、DNA修复以及癌症的发生和发展中发挥着重要作用。RAD51B的突变与多种癌症的发生相关，包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和胰腺癌等。此外，RAD51B基因的SNPs和lncRNA表达也与癌症的发生和发展相关。这些发现为癌症的遗传易感性评估、治疗策略的开发以及预后预测提供了重要的参考价值。
参考文献：
1. Greenhough, Luke A, Liang, Chih-Chao, Belan, Ondrej, Boulton, Simon J, West, Stephen C. 2023. Structure and function of the RAD51B-RAD51C-RAD51D-XRCC2 tumour suppressor. In Nature, 619, 650-657. doi:10.1038/s41586-023-06179-1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37344587/
2. Patch, Ann-Marie, Christie, Elizabeth L, Etemadmoghadam, Dariush, Grimmond, Sean M, Bowtell, David D L. . Whole-genome characterization of chemoresistant ovarian cancer. In Nature, 521, 489-94. doi:10.1038/nature14410. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26017449/
3. JuknytĖ, Gabija, LaurinaitytĖ, Inga, VilkeviČiŪtĖ, Alvita, KriauČiŪnienĖ, Loresa, LiutkeviČienĖ, Rasa. . TBX15 rs98422, DNM3 rs1011731, RAD51B rs8017304, and rs2588809 Gene Polymorphisms and Associations With Pituitary Adenoma. In In vivo (Athens, Greece), 35, 815-826. doi:10.21873/invivo.12322. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33622874/
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6. Song, Honglin, Dicks, Ed, Ramus, Susan J, Gayther, Simon A, Pharoah, Paul D P. 2015. Contribution of Germline Mutations in the RAD51B, RAD51C, and RAD51D Genes to Ovarian Cancer in the Population. In Journal of clinical oncology : official journal of the American Society of Clinical Oncology, 33, 2901-7. doi:10.1200/JCO.2015.61.2408. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26261251/
7. Dietlein, Felix, Wang, Alex B, Fagre, Christian, Neal, James T, Van Allen, Eliezer M. 2022. Genome-wide analysis of somatic noncoding mutation patterns in cancer. In Science (New York, N.Y.), 376, eabg5601. doi:10.1126/science.abg5601. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35389777/
8. Xie, Fanfan, Ding, Ding, Lin, Cong, Wu, Kui, Laheru, Daniel A. . RAD51B Harbors Germline Mutations Associated With Pancreatic Ductal Adenocarcinoma. In JCO precision oncology, 6, e2100404. doi:10.1200/PO.21.00404. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35737913/
9. Wei, Xinyi, Wang, Conghui, Tang, Sangsang, Xu, Junfen, Lu, Weiguo. . RAD51B-AS1 promotes the malignant biological behavior of ovarian cancer through upregulation of RAD51B. In Journal of Zhejiang University. Science. B, 25, 581-593. doi:10.1631/jzus.B2300154. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39011678/
10. Chang, Hsin-Yi, Dermawan, Josephine, Sharma, Aarti, Mechtersheimer, Gunhild, Antonescu, Cristina. 2023. Sarcomas With RAD51B Fusions Are Associated With a Heterogeneous Phenotype. In Modern pathology : an official journal of the United States and Canadian Academy of Pathology, Inc, 37, 100402. doi:10.1016/j.modpat.2023.100402. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38141829/
