智鼠故事 
C57BL/6JCya-Pamem1/Cya 基因敲除小鼠
复苏/繁育服务
产品名称：
Pam-KO
产品编号：
S-KO-18534
品系背景：
C57BL/6JCya
* 使用本品系发表的文献需注明：Pam-KO mice (Strain S-KO-18534) were purchased from Cyagen.
交付类型
周龄
性别
基因型
数量
只
基本信息
品系名称
C57BL/6JCya-Pamem1/Cya
品系编号
KOCMP-18484-Pam-B6J-VA
产品编号
S-KO-18534
基因名
Pam
品系背景
C57BL/6JCya
基因别称
PHM
NCBI号
修饰方式
全身性基因敲除
品系说明
该品系是基于策略设计时的数据库信息制作而成，建议您在购买前查询最新的数据库和相关文献，以获取最准确的表型信息。
小鼠表型
MGI:97475 Homozygous mutation of this gene results in embryonic lethality during fetal growth and development, edema, abnormal yolk sac vasculature, thin arterial walls, and abnormal bronchial epithelial morphology.
质控标准
精子检测
① 冷冻前验证精子活力观察
② 冷冻验证每批次进行复苏验证
品系状态
活体
环境标准
SPF
供应地区
中国
品系详情
Pam位于小鼠的1号染色体，采用基因编辑技术，通过应用高通量电转受精卵方式，获得Pam基因敲除小鼠，性成熟后取精子冻存。
Pam-KO小鼠模型是由赛业生物（Cyagen）采用基因编辑技术构建的全身性基因敲除小鼠。Pam基因位于小鼠1号染色体上，由26个外显子组成，其中ATG起始密码子在2号外显子，TGA终止密码子在26号外显子。Pam基因敲除区域位于3号外显子，包含121个碱基对的编码序列。敲除该区域会导致小鼠Pam基因功能的丧失。
Pam-KO小鼠模型的构建过程包括将核糖核蛋白（RNP）和靶向载体共同注入受精卵。随后，对出生的小鼠进行PCR和测序分析进行基因型鉴定。
需要注意的是，Pam基因的纯合突变会导致胚胎在胎儿生长和发育过程中死亡，并伴随水肿、卵黄囊血管异常、动脉壁变薄和支气管上皮形态异常等现象。由于敲除等位基因导致胚胎死亡，赛业生物（Cyagen）建议研究者生成条件性敲除模型，并可通过与基因删除小鼠的交配获得敲除类型。
Pam-KO小鼠模型可用于研究Pam基因在小鼠体内的功能，以及探索相关疾病的发生机制和治疗方法。
基因研究概述
基因PAM（Protospacer Adjacent Motif）是CRISPR-Cas系统中Cas蛋白识别并结合DNA靶点的重要序列。CRISPR-Cas系统是一种细菌和古菌的免疫机制，用于抵御入侵的病毒和质粒。近年来，CRISPR-Cas系统已被广泛应用于基因编辑和调控领域。PAM序列的识别和结合对于Cas蛋白的功能至关重要，因为它决定了Cas蛋白能够切割或修饰的DNA靶点的范围。
PAM序列通常是位于CRISPR识别序列（protospacer）末端的简短序列，其序列和长度在不同类型的Cas蛋白中有所不同。例如，最广泛使用的SpCas9蛋白识别5'-NGG-3' PAM序列。PAM序列的存在使得Cas蛋白能够精确地识别并结合到特定的DNA序列上，从而实现高效的基因编辑和调控。
然而，PAM序列的限制也限制了CRISPR-Cas系统的应用范围。为了克服这一限制，研究人员已经开发了一系列具有不同PAM识别特性的Cas蛋白变体。例如，SpdCas9是一种经过改造的SpCas9变体，它可以识别更广泛的PAM序列，包括5'-CAT-3'和5'-NRN-3'等。这种改造使得SpdCas9能够在更广泛的DNA靶点上发挥作用，从而扩大了CRISPR-Cas系统的应用范围[1]。
除了SpdCas9之外，还有其他Cas蛋白变体也被开发出来，以识别不同的PAM序列。例如，SedCas9是一种来自Streptococcus equinus的Cas9变体，它可以识别NAG PAM序列。通过替换SedCas9中的PAM结合结构域，研究人员成功地将其PAM识别特性改变为NGG或NAA，从而实现了对更广泛PAM序列的识别[2]。
此外，还有研究开发了一种PAM独立的Cas9变体，称为SpRY。SpRY可以识别并结合到没有PAM序列的DNA靶点上，从而实现了对更广泛DNA靶点的编辑和调控[3]。
总的来说，PAM序列在CRISPR-Cas系统中起着至关重要的作用。通过对Cas蛋白进行改造，研究人员已经开发了一系列具有不同PAM识别特性的Cas蛋白变体，从而扩大了CRISPR-Cas系统的应用范围。这些改造使得CRISPR-Cas系统能够在更广泛的DNA靶点上发挥作用，从而实现了更精确和高效的基因编辑和调控。未来的研究将继续探索PAM序列的特性和功能，并开发更多具有不同PAM识别特性的Cas蛋白变体，以进一步推动CRISPR-Cas系统在基因编辑和调控领域的应用。
参考文献：
1. Wang, Jian, Teng, Yuxi, Zhang, Ruihua, Xie, Zhong-Ru, Yan, Yajun. 2021. Engineering a PAM-flexible SpdCas9 variant as a universal gene repressor. In Nature communications, 12, 6916. doi:10.1038/s41467-021-27290-9. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34824292/
2. Wang, Jian, Teng, Yuxi, Gong, Xinyu, Xie, Zhong-Ru, Yan, Yajun. 2022. Exploring and engineering PAM-diverse Streptococci Cas9 for PAM-directed bifunctional and titratable gene control in bacteria. In Metabolic engineering, 75, 68-77. doi:10.1016/j.ymben.2022.10.005. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36404524/
3. Klanschnig, Marco, Cserjan-Puschmann, Monika, Striedner, Gerald, Grabherr, Reingard. . CRISPRactivation-SMS, a message for PAM sequence independent gene up-regulation in Escherichia coli. In Nucleic acids research, 50, 10772-10784. doi:10.1093/nar/gkac804. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36134715/
