Esp4-KO 基因敲除小鼠

ESP4（exocrine gland-secreting peptide 4）是小鼠中ESP家族的一员，这个家族由38个基因组成。ESP家族的成员在调控许多动物的社会和性行为方面发挥着重要作用。在老鼠中，雄性特异性肽ESP1（exocrine gland-secreting peptide 1）被分泌到泪液中，并增强雌性动物的性接受行为。ESP1是ESP家族的成员之一，与ESP4具有最高的同源性。ESP1在眼外泪腺中表达，而ESP4在一些外分泌腺中表达。因此，ESP4预计具有尚未阐明的功能[1]。

为了研究ESP4的结构和生化特性，需要大量的纯化ESP4蛋白。研究人员通过在大肠杆菌中表达N端组氨酸标记的ESP4融合蛋白，并通过镍亲和层析法进行溶解和纯化。随后，用凝血酶切割组氨酸标签，并通过第二次镍亲和层析去除标签。最后，通过反相层析法得到高纯度的ESP4蛋白。为了进行核磁共振（NMR）分析，还制备了稳定同位素标记的ESP4蛋白。为了去除挥发性污染物并获得具有均匀线形的NMR光谱，研究人员进行了三次重复的冻干步骤。通过氨基酸修饰和远紫外圆二色谱分析，研究人员发现ESP4具有分子内二硫键和螺旋结构[1]。

最近，研究人员还报告了ESP4的¹H、¹⁵N和¹³C的骨架和侧链的NMR指派，这为ESP4的NMR分析提供了基础。这些结果将有助于揭示ESP家族成员之间的结构关系[2]。

ESP4的基因还与医院环境中肠球菌的流行病学有关。在一项研究中，研究人员调查了来自意大利医院的50个连续的耐万古霉素肠球菌（VRE）和23个敏感万古霉素肠球菌（VSE）分离株。通过聚合酶链反应（PCR）检测了esp基因和编码糖肽耐药性的基因的存在。所有分离株都通过多位点序列分型（MLST）进行分型，其中一些还通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分型。研究发现，所有VRE和78%的VSE菌株属于单一的克隆复合体-17（CC17）。最常见的序列类型（ST）是ST78（34%的分离株）。当进一步通过PFGE分析时，ST78分离株被细分为五种脉冲型，其中四种密切相关。esp基因与CC17之间的强关联得到证实。有趣的是，这种关联在耐万古霉素分离株中更高。大多数esp阳性分离株（34/46，74%）编码Esp4，这是一种罕见的Esp蛋白变体，其特征在于A重复序列的缺失。这些发现突出了CC17谱系在医院环境中耐万古霉素肠球菌和敏感万古霉素肠球菌传播中的作用，以及其快速的地方性进化。这强调了需要设计早期检测方案，以防止其在医院人群中传播[3]。

综上所述，ESP4是小鼠中ESP家族的一员，具有尚未阐明的功能。ESP4蛋白的研究为揭示ESP家族成员的结构和功能关系提供了有力的工具。此外，ESP4的基因还与医院环境中肠球菌的流行病学有关，特别是与耐万古霉素肠球菌的传播有关。这些研究对于深入了解ESP4的功能和其在生物医学领域的潜在应用具有重要意义。