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基因编辑大鼠
赛业生物可为您提供基因敲除、点突变、基因敲入等多种基因编辑大鼠服务,还可为您提供SD、Wistar、Long Evans、F344、Brown Norway大鼠等多种品系选择,致力于为您构建更好的大鼠模型。

赛业生物可提供的大鼠类型:

  • SD大鼠:产仔多、生殖力强 、⽣长发育快、抗病能力强。自发肿瘤率低,对性激素感受性高。常用作营养学、内分泌学和毒理学等方面的研究。
  • Wistar大鼠:性周期稳定,繁殖力强,生长发育快。性情温顺,抗病性强,⾃发肿瘤率低。广泛用于营养学、⽣理学、药理学、毒理学及病理生理学等的研究。
  • F344(CDF)大鼠:旋转运动性差,血清胰岛素含量低,脑垂体大。可允许多种肿瘤移植生长,癌症发生的研究中应用较多。
  • Wistar大鼠:性周期稳定,繁殖力强,生长发育快。性情温顺,抗病性强,⾃发肿瘤率低。广泛用于营养学、⽣理学、药理学、毒理学及病理生理学等的研究。
  • Long Evans大鼠:广泛用于行为学、营养学、神经学、毒理学和眼科方面的研究。不易感染呼吸道疾病,对于需要延长吸入麻醉时间的外科⼿术有非常大的优势。
  • Brown Norway大鼠:野生Norway大鼠的变种,毛呈褐⾊,最早用于遗传学研究。对实验性过敏性脑脊髓炎及自身免疫性复合型肾小球肾炎有抗性。

CRISPR-Pro完全性敲除大鼠

CRISPR-Pro完全性基因敲除大鼠主要采用靶基因设计和构建gRNA与Cas表达质粒,造成目的基因的功能区域被敲除,获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的大鼠模型。CRISPR-Pro技术沿用核酸酶介导的基因修饰技术体系,采用独特的受精卵处理方式使受精卵偏好同源重组修复路径,进而提高同源重组效率,制作周期快至3个月。

CRISPR-Pro完全性敲除大鼠的建系原则与流程

  1. 1.
    通过针对靶基因或靶基因不同位点或多个靶基因设计、构建相应的gRNA质粒,体外转录为RNA后,与Cas蛋白和mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子大鼠。
  2. 2.
    F0代杂合子大鼠与野生型大鼠进行交配,获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子大鼠。
  3. 3.
    选择来自同一只F0代大鼠,基因型一致的F1代大鼠,达到性成熟后进行互配,可获得F2代大鼠。对获得的F2代大鼠进行PCR及测序鉴定,理论上,F2代大鼠中25%为纯合子,50%为杂合子,25%为野生大鼠。

CRISPR-Pro条件性敲除大鼠

CRISPR-Pro条件性基因敲除大鼠是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的⼀个或几个重要外显子的两端以制备出flox大鼠,该flox大鼠在与表达Cre重组酶大鼠杂交之前,该基因表达正常;当flox大鼠与组织特异性表达Cre酶的大鼠进行杂交后,可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因,⽽在其它组织或细胞中该基因表达正常。

CRISPR-Pro条件性敲除大鼠的建系原则与流程

  1. 1.
    与野生型大鼠杂交:阳性CRISPR-Pro大鼠(+/flox)与野生型大鼠(+/+)杂交,获得F1代杂合子大鼠(+/flox)。
  2. 2.
    挑选一对F1代杂合子大鼠(+/flox)进行自交,获得F2代纯合子大鼠(flox/flox)。

CRISPR-Pro基因敲入大鼠

CRISPR-Pro基因敲入大鼠是利用CRISPR-Pro基因敲入技术,针对靶基因设计、构建相应的gRNA质粒和donor vector,通过Cas核酸酶的切割作用和同源臂的同源重组,引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型)或将报告基因(如EGFP,mRFP,mCherry,mYFP,或LacZ等)引入目的基因的特定位点,从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达,也可以用报告基因取代大鼠本身的基因,使KO/KI同时发生。

CRISPR-Pro基因敲入大鼠的建系原则与流程:

  1. 1.
    通过针对靶基因设计、构建gRNA质粒并转录为RNA,再合成含有突变位点信息的donor oligo或donor vector,与Cas蛋白和mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子大鼠。
  2. 2.
    F0代杂合子大鼠与野生型大鼠进行交配,获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子大鼠。
  3. 3.
    选择来自同一只F0代大鼠,敲入位点一致的F1代大鼠,达到性成熟后进行同胞交配,可获得F2代大鼠。对获得的F2代大鼠进行PCR及测序鉴定,理论上,F2代大鼠中25%为敲入位点一致的纯合子大鼠,有50%为只有一条染色体敲入的杂合子大鼠,有25%为野生型大鼠。

转基因大鼠

制作转基因大鼠最常用的一种方法是DNA原核显微注射。DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内,注射DNA整合到大鼠受精卵的基因组中,并稳定遗传给后代。赛业所使用的PiggyBac系统DNA显微注射,制备的转基因鼠基因表达阳性率为常规质粒DNA显微注射的2倍以上!

转基因大鼠建系原则与流程:

  1. 1.
    原核显微注射获得PCR阳性F0代杂合子大鼠。原核显微注射导入的目的基因是将目的基因随机整合到大鼠的基因组,首代转基因大鼠(F0)将会有不同的整合位点,整合基因的拷贝数可能在不同的首代转基因大鼠中也不同。因此,每只F0代大鼠需要作为一个独立的谱系研究,并且与其它F0代大鼠分开进行繁殖。
  2. 2.
    F0代大鼠达到性成熟后(8周)与野生型大鼠进行交配,获得F1代大鼠。
  3. 3.
    对交配获得的F1代大鼠进行基因型鉴定,理论上,F1代大鼠中有50%为转基因杂合子大鼠,50%为野生型大鼠。

注意事项:

  • 每只F0代鼠基因型都不一样,不能进行F0之间的自交,只能先与野生型交配,筛选出基因型一致的F1。(假如F0代有多个位点的外源基于整合,F1还有可能有多种基因型)。
  • 获得F1鼠后,可以进行蛋白表达鉴定,优先筛选出表达的鼠后再进行后续的传代和保种。

基因编辑大鼠服务案例文献精选

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CNS neuroscience & therapeutics(2024)Vof16基因敲除大鼠
Panax Quinquefolium Saponins enhances angiogenesis in rats with diabetes and myocardial infarction.
Journal of Ethnopharmacology (2024)PKCδ基因敲除大鼠
Transplantation of human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells for repair of neurological damage in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.
Neural Regeneration Research(2023)Il3基因敲除大鼠
Anti-neuroinflammation effects of transcutaneous auricular vagus nerve stimulation against depression-like behaviors via hypothalamic α7nAchR/JAK2/STAT3/NF-κB pathway in rats exposed to chronic unpredictable mild stress.
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Loss of the heterogeneous expression of flippase ATP11B leads to cerebral small vessel disease in a normotensive rat model.
Acta Neuropathologica(2022)Atp11b基因敲除大鼠
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Biochemical pharmacology(2022)Olr1基因敲除大鼠
Construction and Evaluation of a Novel Organic Anion Transporter 1/3 CRISPR/Cas9 Double-Knockout Rat Model.
Pharmaceutics(2022)Slc22a6/Slc22a8基因敲除大鼠
Development, Characterization, and in vivo Validation of a Humanized C6 Monoclonal Antibody that Inhibits the Membrane Attack Complex.
Journal of Innate Immunity(2022)HC6转基因大鼠
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Bioactive Materials(2021)GFP转基因大鼠
MiR-127-3p targeting CISD1 regulates autophagy in hypoxic-ischemic cortex.
Cell death & disease(2021)miR-127-3p基因敲除大鼠